不同來(lái)源人間充質(zhì)干細(xì)胞的原代培養(yǎng)及傳代 臍帶 脂肪

人間充質(zhì)干細(xì)胞的不同來(lái)源

人類(lèi)骨髓來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞

新生兒臍帶來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞

新生兒臍帶血來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞

人類(lèi)臍帶華通氏膠來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞

人類(lèi)脂肪來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞

人類(lèi)羊水來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞

人類(lèi)牙髓來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞

人類(lèi)皮膚來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞

新生兒胎盤(pán)來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞

人類(lèi)唾液腺來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞

人類(lèi)滑膜來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞

1 人類(lèi)骨髓來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞

密度梯度離心骨髓，貼壁法原代培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞。

人類(lèi)骨髓來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞分離

Ficoll密度梯度離心

人類(lèi)骨髓來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞原代及傳代培養(yǎng)

Knock out DMEM，DMEM+10%FBS

2 新生兒臍帶來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞 新生兒臍帶血來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞

組織塊培養(yǎng)法、密度梯度離心法等處理臍帶、臍帶血，貼壁法原代培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞。

新生兒臍帶來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞 新生兒臍帶血來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞分離

Ficoll-Hypaque 密度梯度離心，酶消化法（0.25% 胰蛋白酶-EDTA），組織塊培養(yǎng)法

新生兒臍帶來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞 新生兒臍帶血來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞原代及傳代培養(yǎng)

DMEM+10%FBS，10%FCS，MSCGM+10%FCS

3人類(lèi)臍帶華通氏膠來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞

組織塊培養(yǎng)法、酶消化法處理華通氏膠，貼壁法原代培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞。

人類(lèi)臍帶華通氏膠來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞分離

組織塊培養(yǎng)法, 酶消化法 (0.1% 膠原酶II,1 mg/ml 膠原酶B+胰蛋白酶, 膠原酶 +hyaluronidase +胰蛋白酶,胰蛋白酶-EDTA, 0.26% 膠原酶I+ 0.07% hyaluronidase+0.125% 胰蛋白酶)

人類(lèi)臍帶華通氏膠來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞原代及傳代培養(yǎng)

DMEM/DMEM-F12 + 10% FBS

4 人類(lèi)脂肪來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞

酶消化法處理脂肪組織，貼壁法原代培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞。

人類(lèi)脂肪來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞分離

酶消化法(1.5 mg/ml 膠原酶 I, 1 mg/ml 膠原酶-I in 0.1% BSA)

人類(lèi)脂肪來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞原代及傳代培養(yǎng)

DMEM-Low Glucose+MCDB201+ 2% FCS,DMEM+ 20% FBS,MesenproRS

5 人類(lèi)羊水來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞

密度梯度離心、酶消化法處理羊水，貼壁法原代培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞。

人類(lèi)羊水來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞分離

密度梯度離心,酶消化法 (0.25% 胰蛋白酶 +1.2 units/ml of dispase + 2 mg/ml 膠原酶I）

人類(lèi)羊水來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞原代及傳代培養(yǎng)

a-MEM + 20% FBS, DMEMF12 + 10% FBS, high glucose DMEM + 20% hESC-defined FBS, KSR-based 培養(yǎng)基

6 人類(lèi)牙髓來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞

酶消化法處理牙髓，貼壁法原代培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞。

人類(lèi)牙髓來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞分離

酶法 (387.1 U/+mg 膠原酶+ 0.70 U/mg dispase II)

人類(lèi)牙髓來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞原代及傳代培養(yǎng)

D-MEM-F12, a-MEM + 2% FCS

7 人類(lèi)皮膚來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞

酶消化法處理皮膚組織，貼壁法原代培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞。

人類(lèi)皮膚來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞分離

酶消化法 (0.6 U/ml dispase, 0.62 Wunsch U/ml Liberase Blendzyme 1,1.25 mg/ml 膠原酶 I)

人類(lèi)皮膚來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞原代及傳代培養(yǎng)

DMEM-F12 1 10/5/0.5% FBS, DMEM + 20% FBS

8 新生兒胎盤(pán)來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞

Ficoll 密度梯度離心、酶消化法處理胎盤(pán)，貼壁法原代培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞。

新生兒胎盤(pán)來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞分離

Ficoll 密度梯度離心, 酶消化法(1 mg/ml Dispase, 300 U/ml 膠原酶, 100 U/ml Hyalluronidase,

80 U/ml DNAse I, 0.25% 胰蛋白酶-EDTA)

新生兒胎盤(pán)來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞原代及傳代培養(yǎng)

DMEM 低糖 + 20% FBS

9 人類(lèi)唾液腺來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞

酶消化法處理唾液腺，貼壁法原代培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞。

人類(lèi)唾液腺來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞分離

酶消化 (1.67 mg/ml 膠原酶+ 1.33 mg/ml hyaluronidase, 1.67 mg/ml dispase; 5.01 mg/ml 膠原酶2 + 3.99 mg/ml hyaluronidase,33.4 mg/ml dispase)

人類(lèi)唾液腺來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞原代及傳代培養(yǎng)

DMEM + 10% FCS, DMEMF12 + 3% FBS

10 人類(lèi)滑膜來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞

Ficoll–Paque 密度梯度離心、酶消化法處理滑膜，貼壁法原代培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞。

人類(lèi)滑膜來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞分離

Ficoll–Paque 密度梯度離心, 酶消化法 (3mg/ml 膠原酶V)

人類(lèi)滑膜來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞原代及傳代培養(yǎng)

a-MEM + 10% FBS, 20% FBS

名詞解釋

Ficoll密度梯度離心 常用來(lái)分離人外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）的分層液比重是 1.077±0.001 的聚蔗糖(Ficoll)-泛影葡胺(Urografin)(F／H)分層液。Ficoll是蔗糖的多聚體，呈中性，平均分子量為400,000，當(dāng)密度為1.2g／ml仍未超出正常生理性滲透壓,也不穿過(guò)生物膜。紅細(xì)胞、粒細(xì)胞比重大，離心后沉于管底；淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的比重小于或等于分層液比重，離心后漂浮于分層液的液面上，也可有少部分細(xì)胞懸浮在分層液中。吸取分層液液面的細(xì)胞，就可從外周血中分離到單個(gè)核細(xì)胞。Ficoll-Paque 分離液適用血液、骨髓和臍帶血來(lái)源的人單個(gè)核細(xì)胞分離（包括間充質(zhì)干細(xì)胞）。

DMEM Dulbecco's Modified Eagle Medium是一種廣泛使用的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，可用于支持很多種類(lèi)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞生長(zhǎng)。

組織塊培養(yǎng)法 組織切成小塊，接種培養(yǎng)器皿培養(yǎng)細(xì)胞。

酶消化法 用胰蛋白酶和膠原酶等消化組織塊，分離細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。

膠原酶 是一種蛋白酶，它能夠特異性的結(jié)合 Pro-X-Glyc-Pro序列中，中性氨基酸（X）和甘氨酸之間的肽鍵。該序列高頻率的存在于膠原中。膠原酶是*的一種可以降解廣泛存在于結(jié)締組織中的具有三股螺旋的天然膠原纖維的蛋白酶。

Hyaluronidase 透明質(zhì)酸酶

Dispase 分散酶

DNAse 脫氧核糖核酸酶

附：人間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)

人間充質(zhì)干細(xì)胞的下游應(yīng)用是組織修復(fù)等疾病治療，因此它的培養(yǎng)要滿足醫(yī)用的高標(biāo)準(zhǔn)。隨著臨床應(yīng)用的成熟，間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基也經(jīng)歷了從有血清到無(wú)血清培養(yǎng)基的轉(zhuǎn)變。

有血清培養(yǎng)基一開(kāi)始使用的是胎牛血清，胎牛血清是天然產(chǎn)品，批次間差異大，影響實(shí)驗(yàn)穩(wěn)定性，尤其還是異源物，會(huì)有病原體污染風(fēng)險(xiǎn)和免疫影響，不利治療安全，需要額外監(jiān)管。于是越來(lái)越多的血清培養(yǎng)基選擇了自體或同源異體的人源血清作為培養(yǎng)基添加物，包括人血清、血小板裂解液和臍帶血清。

低血清或人源血清仍然不夠穩(wěn)定，也不能*免除病原體的污染風(fēng)險(xiǎn)，隨之興起的是成分確定的無(wú)血清培養(yǎng)基。無(wú)血清培養(yǎng)基用重組人蛋白代替血清中的天然蛋白，以此來(lái)消滅異種蛋白輸入人體可能會(huì)引起的免疫抗體反應(yīng)。比如血清中zui基礎(chǔ)的白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白和胰島素，無(wú)血清培養(yǎng)基都改用重組人轉(zhuǎn)鐵蛋白和重組人胰島素代替，而不是提取天然產(chǎn)物。無(wú)血清培養(yǎng)基發(fā)展中，確定了多種生長(zhǎng)因子是人間充質(zhì)干細(xì)胞擴(kuò)增必須添加的。

相關(guān)產(chǎn)品

Ficoll 密度梯度分離液 Ficoll-Paque PREMIUM改良于Ficoll-Paque PLUS，后者作為一種從骨髓、外周血和臍帶血中高得率分離單個(gè)核細(xì)胞的無(wú)菌密度梯度介質(zhì)已應(yīng)用了三十多年。與Ficoll-Paque PLUS不同的是，F(xiàn)icoll-Paque PREMIUM的生產(chǎn)是在嚴(yán)格控制環(huán)境下完成的, 生產(chǎn)條件符合ISO 13485:2003標(biāo)準(zhǔn)，GMP認(rèn)證和美國(guó)藥典的建議，可用于生產(chǎn)細(xì)胞治療相關(guān)產(chǎn)品。細(xì)胞毒性等級(jí)為0。有RSF文件。

膠原酶 I 型膠原酶從溶組織梭菌制備，用于細(xì)胞和組織的解離。

人間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基 與以DMEM為基礎(chǔ)的血清培養(yǎng)基相比優(yōu)勢(shì)在于，成分確定，無(wú)動(dòng)物源成分，適合臨床研究。HY StemCell CCGmHum^TM 人間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基是成分確定、無(wú)血清、無(wú)動(dòng)物源，無(wú)需鋪板膠的*培養(yǎng)基。適用臍帶或脂肪來(lái)源的人間充質(zhì)干細(xì)胞的原代培養(yǎng)。培養(yǎng)的hMSC可傳多代。HY STEMCELL CCGmHuM^TM 人間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基包括【Basal Medium 基礎(chǔ)培養(yǎng)基】 和 【Supplement Medium 細(xì)胞因子添加物】?jī)刹糠??；A(chǔ)培養(yǎng)基中添加Hepes和L-谷氨酰胺。細(xì)胞因子添加物中含有多種細(xì)胞生長(zhǎng)因子、粘附蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、胰島素、微量元素和人白蛋白等成分。

產(chǎn)品信息

密度梯度分離液 膠原酶

人間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基

人間充質(zhì)干細(xì)胞的鑒定參見(jiàn)人間充質(zhì)干細(xì)胞流式檢測(cè)方案

參考文獻(xiàn)

1 Dolly Mushahary, et al. Isolation, C*tion, and Characterization of Human Mesenchymal Stem Cells.2017

2 人類(lèi)間充質(zhì)干細(xì)胞庫(kù)建設(shè)與管理規(guī)范，SZDB/Z 126-2015

更多間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)品華雅再生醫(yī)學(xué)旗艦公司：紅榮微再（上海）生物工程技術(shù)有限公司，紅榮微再（上海）生物工程技術(shù)有限公司以“傳遞科學(xué)價(jià)值，服務(wù)科學(xué)研究”為宗旨，主營(yíng)干細(xì)胞、醫(yī)療、細(xì)胞治療、器官再生四大板塊的產(chǎn)品。