轉(zhuǎn)染效率低？這份細(xì)胞轉(zhuǎn)染攻略，快收藏了吧！

從導(dǎo)入的核酸存在于宿主細(xì)胞的時(shí)間長短，可將轉(zhuǎn)染分為瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。

瞬時(shí)轉(zhuǎn)染（transient transfection）：指將構(gòu)建好的質(zhì)粒通過某種方式導(dǎo)入到哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)，該質(zhì)粒上的外源基因不整合到細(xì)胞自身的基因組上。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的基因表達(dá)是快速且短暫的，通常只能維持幾天。這種轉(zhuǎn)染方式主要用于快速檢測基因功能或蛋白質(zhì)表達(dá)，例如了解基因沉默、抑制性RNA和小規(guī)模蛋白質(zhì)生產(chǎn)等。

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染（Stable transfected）：將外源DNA整合到宿主細(xì)胞的基因組中，這種整合過程需要更長時(shí)間和更復(fù)雜的操作。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染后的基因表達(dá)是長期且穩(wěn)定的，因?yàn)橥庠椿驎?huì)被傳遞給子代細(xì)胞。這種轉(zhuǎn)染方式主要用于長期表達(dá)目標(biāo)基因的實(shí)驗(yàn)，例如生產(chǎn)重組蛋白、進(jìn)行基因敲除或敲入等研究。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染也用于藥物篩選、研究形態(tài)變化、抗生素耐藥性等領(lǐng)域。

細(xì)胞轉(zhuǎn)染通?？煞譃槿愅緩椒謩e為物理介導(dǎo)、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)。

物理介導(dǎo)：電穿孔法、顯微注射和基因槍等

化學(xué)介導(dǎo)：如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法和多種陽離子物質(zhì)介導(dǎo)技術(shù)等

生物介導(dǎo)：病毒介導(dǎo)，逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒等

怎么選擇轉(zhuǎn)染試劑：

小編對(duì)這三個(gè)途徑的常用方法進(jìn)行了總結(jié)，記得給小編點(diǎn)個(gè)收藏hahaha~

物理介導(dǎo)——電穿孔法

原理：電流能夠擊穿細(xì)胞膜形成瞬時(shí)的水通路或膜上小孔促使DNA分子進(jìn)入胞內(nèi)。

優(yōu)點(diǎn)：原理簡單；不需要載體。

缺點(diǎn)：需要特殊設(shè)備，電流對(duì)細(xì)胞傷害非常大。

化學(xué)介導(dǎo)——脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染

原理：陽離子脂質(zhì)體表面帶正電荷，與核酸的磷酸根通過靜電作用，將DNA分子進(jìn)行包裹，形成DNA脂復(fù)合物，能被表面帶負(fù)電的細(xì)胞膜吸附，再通過細(xì)胞內(nèi)吞進(jìn)入細(xì)胞。

優(yōu)點(diǎn)：操作比較簡單，轉(zhuǎn)染效率高。

缺點(diǎn)：需要進(jìn)行條件優(yōu)化；有些細(xì)胞體系不易轉(zhuǎn)染；對(duì)血清敏感；價(jià)格較高。

化學(xué)介導(dǎo)——陽離子聚合物

原理：與脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染原理相似，都是利用陽離子與核酸結(jié)合成復(fù)合物，利用細(xì)胞內(nèi)吞進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。

優(yōu)點(diǎn)：在血清內(nèi)穩(wěn)定；對(duì)細(xì)胞毒性相對(duì)較低；轉(zhuǎn)染率高；性價(jià)比高。

缺點(diǎn)：需要對(duì)體系進(jìn)行條件優(yōu)化；有些細(xì)胞體系不易轉(zhuǎn)染。

生物介導(dǎo)——病毒感染

原理：通過侵染宿主細(xì)胞從而將外源基因?qū)氲郊?xì)胞中。

優(yōu)點(diǎn)：高轉(zhuǎn)染率；適用性廣。

缺點(diǎn)：需要對(duì)體系進(jìn)行條件優(yōu)化；需要構(gòu)建病毒載體，步驟較為復(fù)雜。

然而，一種方法不會(huì)適用于所有的細(xì)胞和實(shí)驗(yàn)，理想的轉(zhuǎn)染方法應(yīng)該根據(jù)自己的細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)需求來選擇。合適的細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法應(yīng)具有高轉(zhuǎn)染效率，低細(xì)胞毒性和對(duì)正常生理學(xué)的影響最小，且易于使用和可重復(fù)性等特點(diǎn)。