心肌分化試劑盒的凍存方法

 　　心肌分化試劑盒具備心肌定向分化能力，可用于人多潛能干細胞(hESC/iPSC)向心肌細胞誘導(dǎo)分化。分化獲得的心肌細胞表達常規(guī)的心肌特異性基因，包括多種收縮蛋白和離子通道。同時，心肌細胞具備典型的心肌細胞電生理活性，能夠?qū)﹄娚砗蜕锘瘜W(xué)刺激做出心肌細胞的常規(guī)反應(yīng)。分化獲得的心肌細胞，各項特征與人體內(nèi)心肌細胞高度相似，適合于基礎(chǔ)和臨床科學(xué)研究等。

　　心肌分化試劑盒包含有多肽類分化因子和涉及心肌細胞分化關(guān)鍵信號通路的調(diào)控因子的無血清培養(yǎng)基。在對人ESCs和iPSC不同細胞系的實驗中，本試劑盒能得到心肌細胞分化效率比所有已發(fā)表方法都高的結(jié)果。

　　心肌分化試劑盒的特點主要有以下幾點：

　　1.單層培養(yǎng)，均質(zhì)分化

　　2.多細胞系可重復(fù)性好

　　3.跳動層細胞7天即可觀察

　　4.誘導(dǎo)分化程序簡單便捷

　　心肌分化試劑盒的凍存方法：

　　1、如果需要將心肌細胞長期保存，可對心肌細胞進行凍存，凍存操作會導(dǎo)致40%左右的細胞死亡。

　　2、37℃水浴預(yù)熱PBS溶液和Accutase傳代工作液，4℃預(yù)冷心肌分化試劑盒。

　　3、吸走心肌維持培養(yǎng)基，并且加入PBS溶液洗一次。

　　4、加入Accutase傳代工作液使之*覆蓋皿/瓶底。

　　5、37℃孵育15-20分鐘，顯微鏡下觀察到大部分細胞相互分離，表面細胞消化時間理想。

　　6、用槍扇形吹打培養(yǎng)皿/瓶底，使皿/瓶底貼附的心肌細胞脫落，將細胞轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，再向皿/瓶中加入適量PBS溶液潤洗皿/瓶底，收集剩余細胞加入15ml離心管中。(注：吹打力度要輕柔，避免損傷心肌細胞)

　　7、200g離心5分鐘。棄去上清，用重懸細胞，輕柔吹打混勻。

　　8、按復(fù)蘇所需要的量，1ml每管凍存。

　　9、以1℃每分鐘的速率降至-80℃過夜(一般常見商品化凍存盒均可提供此條件)。

　　10、-80℃過夜后，將凍存細胞轉(zhuǎn)移至液氮保存。

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